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帕金森和阿尔茨海默造模用蛋白
人阅读 发布时间:2021-09-02 14:04
帕金森和阿尔茨海默造模用蛋白
帕金森疾病造模--活体注射α-突触核蛋白
帕金森疾病是一种常见的神经退行性疾病。主要的病理特征是黑质多巴胺能神经元变性缺失和路易小体的形成。临床表现为行动迟缓,静止性震颤,肌强直和步态异常等。ɑ-突触核蛋白是一种可溶性的蛋白,广泛地存在于正常人的脑组织中。该蛋白是路易小体的主要结构成分。ɑ-突触核蛋白聚集与路易小体的形成以及多巴胺能神经元的死亡密切相关。
StressMarq公司是神经衰退疾病研究工具行业的口碑良好的制造商,是活性α突触核蛋白单体,寡聚体,前体原纤维的生产商。前体原纤维,又称 alpha 突触核蛋白原纤维 PFFs。PFF是制作帕金森疾病模型的重要工具,它们可以大大加速α突触核蛋白单体的聚集。Stressmarq公司研发的活性 alpha 突触核蛋白原纤维 PFFs可以直接注射到活体动物产生病例反应。通过注射 alpha 突触核蛋白原纤维制作帕金森疾病模型的时间要远远短于传统的基因改造小鼠和大鼠。通常注射后30天即可见到病理反应,而基因改造模型需要9个月到1年时间。
Stressmarq的活性 alpha突触核蛋白原纤维可以作为“种子”催化更多活性单体形成聚集体沉积。
活体注射建造帕金森疾病模型实验步骤
该实验操作是将Ⅰ型小鼠 alpha 突触核蛋白原纤维 PFFs (Stressmarq, cat#SPR-324) 或 Ⅰ型人 alpha 突触核蛋白原纤维PFFs (Stressmarq, cat#SPR-322) 注射到大鼠脑中来产生 alpha突触核蛋白病理特征。小鼠 alpha突触核蛋白原纤维PFFs 显示出了更强的聚集效果。
使用的动物: 雌性 SD (Sprague Dawley) 大鼠
2 uL PFFs 或者单体 (阴性对照) 通过以下两个脑顶叶区的位置注射:
AP + 1.6, ML + 2.4, DV – 4.2
AP – 1.4, ML + 0.2, DV – 2.8
30 天后, 用生理盐水灌注大鼠然后在大鼠脑冠状平面切开,将中脑与前脑分开。之后两部分都用 4% PFA 固定 48 小时。可以用Stressmarq的SMC-600抗体通过IHC实验检测是否造模成功。
StressMarq 目前正在研发更多的原纤维新品用于神经衰退疾病研究,并且也在完善我们现有的产品线。下面表格列出了各种蛋白的区别: Featured Alpha Synuclein Proteins and Antibodies:
1 型 PFFs (SPR-322) | 1型 PFFs (SPR-324) | 1 型 PFFs (SPR-326) | 2 型 PFFs (SPR-317) | 3 型 PFFs (SPR-448) | 蛋白纤维 (SPR-450) | |
物种来源 | 人 | 小鼠 | 人 | 人 | 人 | 人 |
突变类型 | 野生型 | 野生型 | A53T | 野生型 | 野生型 | 野生型 |
单体来源 | SPR-321 | SPR-323 | SPR-325 | SPR-316 | SPR-316 | SPR-321 |
内毒素水平 | 制作时含有内毒素LPS, 并且没有移除 | 制作时含有内毒素LPS, 并且没有移除 | 制作时含有内毒素LPS, 并且没有移除 | 纤维聚集之前移除了LPS (低内毒素) | 纤维聚集之前移除了LPS (低内毒素) | 制作时含有内毒素LPS, 并且没有移除 |
ThT 检测 | 与SPR-321 单体混合时荧光强度>12 000 荧光单位 与 SPR-316 单体混合时荧光强度为1300 荧光强度 | 与SPR-323单体混合时荧光强度> 3100 荧光单位 | 与SPR-325单体混合时有28 000 荧光单位 | 与SPR-321单体混合时有3000荧光单位 与SPR-316 单体混合时有400荧光单位 | 调研中 | 调研中 |
原代细胞活性 | 在原代大鼠细胞中会诱发路易体病理现象 | 在原代大鼠细胞中会诱发路易体病理现象 | 调研中 | 在原代大鼠细胞中不会诱发路易体病理现象 | 调研中 | 调研中 |
活体内活性 | 在大鼠大脑中注射后30天内产生病理反应 | 在大鼠大脑中注射后30天内产生病理反应 | 调研中 | 调研中 | 调研中 | 调研中 |
Ⅲ型stressmarq的 alpha突触核蛋白原纤维PFFs (使用新型支架制作) 与stressmarq的Ⅰ型 alpha 突触核蛋白原纤维PFFs 结构和活性都相似,但是内毒素水平较低与Ⅱ型alpha突触核蛋白原纤维 PFFs 相似。alpha突触核蛋白原纤维PFFs 不可溶而蛋白纤维可溶,但是可能根据操作手法不同会有少量不溶原纤维。 抑制剂可以停滞alpha突触核蛋白的聚集,阻止寡聚体形成原纤维。以下是抑制剂阻滞的寡聚体:
盐酸多巴胺处理的寡聚体 (SPR-466) | 黄芩苷元处理的寡聚体 (SPR-467) | EGCG 处理的寡聚体 (SPR-469) | |
抑制剂 | 盐酸多巴胺 (Dopamine HCl) | 黄芩苷元 (Baicalein) | 表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG) |
物种来源 | 人 | 人 | 人 |
突变类型 | 野生型 | 野生型 | 野生型 |
单体来源 | SPR-321 | SPR-321 | SPR-321 |
内毒素 | 制作时含有内毒素LPS, 并且没有移除 | 制作时含有内毒素LPS, 并且没有移除 | 制作时含有内毒素LPS, 并且没有移除 |
只含有抑制剂-阻滞的寡聚体的ThT检测在24小时内没有显示荧光强度增强,当与1型单体混合时荧光强度有所增加。 但是这个增加比单独1型单体的增加要少。这说明这些抑制剂-阻滞的寡聚体减缓了单体的聚集。ThT 是一种荧光染料,可以绑定富含beta折叠的结构, 例如alpha 突触核蛋白原纤维. 抑制剂介入-盐酸多巴胺处理的寡聚体 (SPR-466) 显示的荧光强度和单体 (SPR-321) 相比要少得多。单体和抑制剂介入的寡聚体混合后显示的聚集作用很有限。
阿尔茨海默疾病造模--活体注射Tau蛋白
阿尔茨海默症是一种中枢系统退行性疾病,主要的现象是记忆力下降,认知功能障碍,并出现语言和运动障碍。目前针对该疾病的研究也非常多,方法主要建立在构建动物模型和细胞模型,根据不同的实验目的,选择合适的模型尤为重要。阿尔茨海默的发病机制复杂,至今仍未阐述清楚,其中比较主流的观点认为神经元纤维缠结的沉积与阿尔茨海默症中认知衰退密切相关,而tau蛋白是重要的组成成分。Tau蛋白广泛分布于中枢神经系统的神经元中,是一种微管相关的蛋白质,可调节微管蛋白的稳定性。在阿尔茨海默症患者大脑中,纤维缠结普遍存在,磷酸化tau蛋白增加了数倍,说明磷酸化tau蛋白聚集对突触和神经元的毒性作用。StressMarq 是可以提供活性 tau PFFs 的生物公司,所有活性 tau PFFs 都可用于注射活体制作疾病模型,制模时间 (30 天) 远远少于传统的基因改造小鼠 (9 个月到 1 年),是研究阿尔茨海默氏症的有效工具。
Stressmarq研制了活性 tau 蛋白,这些活性蛋白都不含有肝素等添加剂,可以用于研究二硫键在 tau 蛋白聚集中的作用,而且可以用于注射入小鼠/大鼠活体内制作疾病模型,30 天可见病理反应。也有文献中体外细胞培养实验表明,外源性的tau蛋白原纤维可能通过内吞作用被细胞内化,并使内源性tau蛋白聚集产生错误折叠的构象。具体产品来电来邮咨询。